Sanae Hayashi1, Shuko Murakami1, Katsumi Omagari1, Takeshi Matsui1,2, Etsuko Iio1, Masanori Isogawa1, Tsunamasa Watanabe1, Yoshiyasu Karino3, Yasuhito Tanaka1,*
1 Department of Virology & Liver Unit, Nagoya City University Graduate School of Medical Science, Nagoya, Japan; 2 Center for Gastroenterology, Teine Keijinkai Hospital, Sapporo, Japan; 3 Department of Gastroenterology, Sapporo Kosei General Hospital, Hokkaido, Japan
* Автор, ответственный за переписку. Адрес: Department of Virology & Liver Unit, Nagoya City University Graduate School of Medical Science, Kawasumi 1, Mizuho-ku, Nagoya 467-8601, Japan. Tel.: +81 52 853 8191; fax: +81 52 842 0021.
E-mail: ytanaka@med.nagoya-cu.ac.jp (Y. Tanaka).
Актуальность и цели. Энтекавир (ETV) — противовирусный препарат, одобренный для лечения хронического гепатита B (ХГВ). С течением времени у вируса может развиваться резистентность к этому препарату. Для этого необходимо наличие мутации резистентности к ламивудину (LAMr) и как минимум еще одной мутации. В данной работе описаны две новые мутации, rtI163V и rtA186T, связанные с повышением вирусной нагрузки (ПВН) у пациентов с устойчивостью к ETV.
Методы. Вирусная ДНК, полученная у пациента с устойчивостью к ETV, была секвенирована, обнаруженные новые мутации были перенесены в способные к репликации клоны с помощью мутагенеза. Был проведен анализ эффективности репликации клонов и их чувствительности к ETV in vitro. Химерным мышам с человеческими гепатоцитами была введена сыворотка пациента с ПВН, и изучены характеристики вирусных мутаций с помощью метода секвенирования нового поколения.
Результаты. Мутации rtI163V и rtA186T на момент ПВН были обнаружены вместе с LAMr (rtL180M и rtM204V). Комбинация rtA186T + LAMr снижала чувствительность вируса к ETV более чем в 111,1 раза по сравнению с клоном дикого типа, в то время как комбинация rtI163V + LAMr — в 20,4 раза. Мутация rtA186T значимо снижала эффективность вирусной репликации, тогда как rtI163V, наоборот, повышала ее. Изучение мутаций у химерных мышей при лечении ETV показало доминирующую (или селективную) пролиферацию клона с rtI163V и rtA186T + LAMr. Трехмерная симуляция молекулярного докинга продемонстрировала, что rtA186T снижала аффинность вирусной полимеразы к ETV.
Выводы. ПВН у пациента с устойчивостью к ETV обусловлен наличием новых мутаций ETV-резистентности — rtI163V и rtA186T. Мутация rtA186T была ответственна за ETV-резистентность, однако селекция клона с двойной мутацией + LAMr, возможно, говорит о роли rtI163V в поддержании жизнеспособности вируса.
© 2015 European Association for the Study of the Liver.
Ключевые слова: вирус гепатита В, энтекавир, ламивудин, резистентность, мутации, лечение гепатита В, комбинированная терапия, rtA186T, rtI163V.
Получено 19 января 2015 г.; получено с поправками 11 марта 2015 г.; принято в печать 13 марта 2015 г.; опубликовано онлайн 25 марта 2015 г.
Полный контент только для зарегистрированных пользователей сайта. Если Вы уже являетесь пользователем, пожалуйста, войдите в систему.